抗HBsAg-Fab重組體在小鼠肝臟的表達

摘要： 目的:研究人抗HBsAg-Fab重組體在小鼠體內(nèi)的表達分泌．方法:將所構(gòu)建的pXXUF1-HBs-Fab質(zhì)粒以 5、10、20和40μg的劑量分別利用尾靜脈液壓法轉(zhuǎn)染C57BL／6小鼠,建立實驗1-4組;同時設(shè)立pXXUF1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對照組和空白組．轉(zhuǎn)染 3 d后采集血清和肝、腎、脾等組織標(biāo)本,運用RT-PCR,ELISA和免疫組織化學(xué)染色等方法從基因和蛋白水平分析基因工程抗體人抗 HBsAg-Fab在體內(nèi)的表達能力．結(jié)果:尾靜脈液壓注射pXXUF1-HBs-Fab組小鼠血清中證實了人源性Fab蛋白的分泌性表達,各實驗組血清中表達量分別為201．3± 13．7、213．1±13．5、513．6±12．8和954．1± 12．7μg／L,并具有與HBsAg特異性結(jié)合的活性,蛋白表達與注射質(zhì)粒劑量有正相關(guān)(r= 0．912,P<0．01);對照組和空白組血清中則未測到目的蛋白．實驗組肝、腎、脾組織RT-PCR 檢測可見肝組織中有Fd重鏈及κ輕鏈的mRNA 表達;免疫組織化學(xué)檢測顯示肝細(xì)胞胞質(zhì)中有棕黃色陽性顆粒,且部分腎小球毛細(xì)血管腔內(nèi)壁和腎臟集合管壁可見附著的Fab蛋白, 腎實質(zhì)細(xì)胞及脾臟均未見Fd重鏈及κ輕鏈的 mRNA和目的蛋白表達;對照組和空白組均未檢測到目的蛋白．結(jié)論:pXXUF1-HBs-Fab成功于小鼠肝臟分泌表達人抗HBsAg-Fab重組體,其表達水平與質(zhì)粒DNA注射劑量存在正相關(guān)關(guān)系,并可通過腎小球濾過代謝． ... （共7頁）